癌变·畸变·突变 ›› 2004, Vol. 16 ›› Issue (2): 74-77.doi: 10.3969/j.issn.1004-616x.2004.02.002
王朝阳;许丽艳;荣 举;李劲涛;李恩民
WANG Zhao-yang;XU Li-yan;RONG Ju; et al
摘要: 背景与目的: 通过对新癌基因NGAL的原核融合表达产物进行Ni2+-金属鏊合层析纯化及其MALDI-TOF-MS 鉴定,最后获得一定丰度与纯度的NGAL蛋白。 材料与方法: 将pDsbA2.0-NGAL融合表达载体转化大肠杆菌,进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物的产量与可溶性,然后将表达产物进行N i2+-金属鏊合层析纯化及其MALDI-TOF-MS鉴定。结果:将pDsbA2.0-NGAL融合表达载体进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析显示表达的NGAL融合蛋白产量高、可溶性好;对表达的NGAL蛋白进行Ni2+-金属鏊合层析纯化后其纯度>95 %,MALDI-TOF-MS鉴定结果提示纯化后NGAL蛋白分子量与其理论分子量的误差仅为0.91 ‰。结论:通过对新癌基因NGAL的原核融合表达产物进行 Ni2+-金属鏊合层析纯化及其MALDI-TOF-MS鉴定,最后确切获得了一定丰度电泳纯的NGAL蛋白,这为下一步制备其抗体奠定了良好的实验材料。